Комплекс №291 "Пап-тест з імуноцитохімією р16, Ki-67 (схвалено FDA)"

Діагностичний напрямок

Онкологічні маркери та скринінги

Загальна характеристика

Пап-тест - один із методів скринінгу на рак шийки матки.  Згідно стандарту медичної допомоги "Скринінг раку шийки матки. Ведення пацієнток з аномальними результатами скринінгу та передраковими станами шийки матки"  стратегії цервікального скринінгу включають або первинний скринінг на вірус папіломи людини (ВПЛ), або цитологічне дослідження шийки матки (ЦДШМ). Для рутинного скринінгу РШМ за інформованої згоди пацієнтки проводиться ЦДШМ кожні 3 роки у жінок у віці 21-65 років або первинне тестування на ВПЛ із генотипуванням (для визначення ВПЛ високого онкогенного ризику) кожні 5 років з 25 до 65-річного віку.
Пап-тест методом рідинної цитології (технологія SurePath BD) - сучасна та найбільш ефективна автоматизована методика, рекомендована FDA (США) та директивами СЕ. Порівняно з традиційною цитологією Пап-тест методом рідинної цитології (технологія SurePath BD) дає змогу:
•збільшити на 64,4% виявлення HSIL (дисплазій середнього та важкого ступенів ураження) та на 107 % рівень виявлення LSIL (дисплазій легкого ступеню)
•знизити на 58% кількість незадовільних цитологічних препаратів
•покращити на 75% диференціювання процесів запалення та слабко вираженої дисплазії (ASCUS)
•при одномоментному заборі біологічного матеріалу провести 2 дослідження: цитологічне та виявлення ДНК ВПЛ.
Імуноцитохімія (ІЦХ) — це лабораторний метод якісного виявлення специфічних білків у цитологічних препаратах за допомогою реакції антиген-антитіло. У контексті скринінгу раку шийки матки набір CINtec PLUS Cytology Kit використовує коктейль первинних моноклональних антитіл для одночасного виявлення двох біомаркерів у клітинах епітелію шийки матки:
• p16INK4a: білок, що регулює клітинний цикл. Його надмірна експресія є сурогатним маркером трансформуючої інфекції вірусом папіломи людини (ВПЛ).
• Ki-67: маркер клітинної проліферації (поділу), який зазвичай відсутній у клітинах, що перебувають у стані спокою (G0).
Метод базується на ферментативному перетворенні хромогенів, що дозволяє візуально ідентифікувати білки під світловим мікроскопом:
• p16INK4a виявляється у вигляді коричневого осаду (хромоген DAB) у цитоплазмі та/або ядрі клітини.
• Ki-67 виявляється у вигляді червоного осаду (хромоген Fast Red) виключно в ядрі.
Система CINtec PLUS призначена для діагностики in vitro (IVD) та схвалена для використання як допоміжний засіб у скринінгу. Вона оптимізована для роботи на автоматизованих інструментах серії BenchMark IHC/ISH (GX, XT, ULTRA, ULTRA PLUS). 

Цитологічний тест CINtec® PLUS — це якісний імуноцитохімічний аналіз, схвалений FDA для використання зі зразками цитології шийки матки, зібраними медичним працівником. Оцінка мікропрепаратів (скелець), забарвлених за допомогою набору CINtec PLUS Cytology Kit, повинна проводитися виключно сертифікованим фахівцем, який пройшов відповідне навчання з інтерпретації результатів цих тестів. 

Оцінка ІЦХ CINtec PLUS Cytology сертифікованим спеціалістом

В Recommendations for Use of p16/Ki67 Dual Stain for Management of Individuals Testing Positive for Human Papillomavirus MeganClarke, 2024 рекомендовано застосовувати як допоміжний інструмент для тріажу (сортування) пацієнтів у таких клінічних ситуаціях:

1. Сортування ВПЛ-позитивних результатів

Це основне призначення тесту, схвалене FDA.

Його застосовують для визначення подальшої тактики у жінок, які мають позитивний результат ВПЛ високого ризику, отриманий під час:

• Первинного ВПЛ-скринінгу (коли ВПЛ-тест є першим етапом обстеження).

• Ко-тестування (одночасне проведення ПАП-тесту та ВПЛ-тесту).

• Ситуацій, коли обмежене генотипування ВПЛ (визначення типів 16 та 18) недоступне або не проводилося.

2. Сортування аномальних результатів ПАП-тесту

Імуноцитохімія використовується для уточнення ризику у пацієнток із сумнівними результатами традиційної цитології:

• ASC-US (клітини плоского епітелію невизначеного значення).

• LSIL (плоскоклітинне інтраепітеліальне ураження низького ступеня).

• Ситуації, коли ПАП-тест негативний (NILM), але ВПЛ-тест позитивний.

3.Подальше спостереження

Тест може бути застосований у процесі моніторингу пацієнток після:

• Отримання аномальних результатів попереднього скринінгу.

• Проведення кольпоскопії, якщо вона не виявила CIN2+.

• Проведеного лікування передракових станів шийки матки для оцінки його ефективності та ризику рецидиву.

Проте для останньої категорії немає достатньо даних щодо ефективності. 

4. Сценарії з урахуванням генотипу ВПЛ

Відповідно до настанов ASCCP та робочої групи Enduring Guidelines:

• Для ВПЛ 16/18: Хоча імуноцитохімічне дослідження  може бути корисним, пацієнтки з цими типами ВПЛ часто підлягають негайній кольпоскопії незалежно від результату ІЦХ через їхній надвисокий онкогенний ризик.

• Для інших 12 типів ВПЛ високого ризику: Позитивний результат ІЦХ є прямою підставою для направлення на кольпоскопію, тоді як негативний результат дозволяє безпечно відкласти повторне обстеження на 1 рік.

ІЦХ р16Кі67 НЕ рекомендується:

• Як самостійний (первинний) скринінговий тест без попереднього ВПЛ-тесту або цитології.

• Для пацієнтів із негативним результатом на ВПЛ.

• У випадках, коли цитологія вже виявила серйозні зміни, такі як HSIL, ASC-H або AGC, оскільки вони потребують негайної кольпоскопії без додаткового сортування.

Фактори, що негативно впливають на якість зразка клітин шийки матки:

Менструація, аномальна маткова кровотеча;

Запальні захворювання піхви та шийки матки;

Статевий акт протягом 24 годин до забору зразка;

Виражений генітоуринарний синдром;

Вагітність, післяпологовий період та період лактації;

Фізикальні маніпуляції або хімічні подразнення  такі як: попереднє пальцеве дослідження піхви, дезінфікуючий крем або розчин, лубрикант, вагінальні лікарські засоби, вагінальні спринцювання або сперміцидний гель (менш ніж за 24 години до цього), попередня кольпоскопія з оцтовою кислотою (менш ніж за 24 години до цього), попереднє цитологічне дослідження шийки матки (менше ніж за 3 тижні до цього); хірургічне втручання на шийці матки (менше ніж за 3 місяці до цього); Променева терапія.

Показання для призначення

Пап-тест є частиною стратегії скринінгу на рак шийки матки та ведення пацієнток з аномальними результатами скринінгу та патологією шийки матки  відповідно до СМД "Скринінг раку шийки матки. Ведення пацієнток з аномальними результатами скринінгу та передраковими станами шийки матки" ГС 2024-1057 від 18.06.2024.

У березні 2020 року Управління з продовольства і медикаментів США (FDA) схвалило використання імуноцитохімії p16INK4a/Ki-67 для цитологічного дослідження (комерційно доступного в США як CINtec PLUS Cytology [Roche Diagnostics]) для сортування з метою визначення тактики ведення пацієнтів із позитивними результатами на ВПЛ, отриманими під час первинного ВПЛ-скринінгу або ко-тестування.
• cортування * ВПЛ-позитивних результатів, коли скринінговий тест надає обмежене генотипування**
• cортування ВПЛ-позитивних результатів у поєднанні з цитологією (ко-тест)
• cортування ВПЛ-позитивних результатів під час спостереження після аномальних результатів скринінгу, кольпоскопії та лікування.
*Сортування - це застосування додаткових досліджень після первинного скринінгу (наприклад, Пап-тесту чи первинного ВПЛ-скринінгу), з метою відбору жінок із підвищеним ризиком злоякісної патології шийки матки для подальшого обстеження/лікування.
**Термін «обмежене генотипування» означає схвалені FDA тести первинного скринінгу, що окремо визначають ВПЛ 16 і 18 та можуть додатково виявляти інші високоонкогенні типи.

Маркер

Комплекс поєднує маркери цито-морфологічних змін в епітелії шийки матки та трансформуючої ВПЛ-інфекції

Клінічна значущість

До складу комплексу входять:

• Пап-тест методом рідинної цитології (технологія SurePath BD)
• Імуноцитохімія р16, Ki-67 (CINtec PLUS Cytology, схвалено FDA)

Правила підготовки

Правила доставки біоматеріалів до лабораторії