Функциональная активность гранулоцитов крови (DHR-тест)

Общая характеристика

Фагоцитоз – комплекс реакций, направленных на распознавание, поглощение и элиминацию из организма микроскопических частиц.
Многие типы клеток в той или иной степени способны к фагоцитозу, однако для иммунной системы наибольшее значение имеет фагоцитарная активность именно нейтрофилов.
При этом выделяют несколько основных этапов фагоцитарного процесса:
• Адгезия – прилипание клеток к микробам.
• Поглощение микроба, с образованием фагосомы.
• Дегрануляция – выброс специальных микробоцидных факторов в фагосому, содержащую поглощенного микроба.
• Окислительный взрыв – резкое снижение рН в фаголизосоме.
• Гибель и деградация микроба в фаголизосоме под действием микробоцидных факторов и низкого рН.
Сбой хотя бы на одном из указанных этапов приводит к так называемому неэффективному фагоцитозу.
К примеру, нейтрофилы могут присутствовать в крови в нормальном количестве, проявлять полноценную хемотаксическую и поглотительную активность, но при этом не убивая поглощенные микроорганизмы.
Возможен вариант, когда в лабораторных тестах фагоциты демонстрируют высокий окислительный потенциал (метаболический резерв), однако нарушен процесс распознавания и поглощения микробов.
Недостаточно эффективно процесс очистки организма от патогенов будет проходить и в том случае, если концентрация нейтрофилов в крови по каким-либо причинам снижена.
Именно поэтому функциональную активность гранулоцитов следует оценивать комплексно.
В нашей лаборатории используется тест-система, которая позволяет проводить реакцию в условиях цельной крови, в присутствии опсонизирующих факторов сыворотки, что намного повышает объективность исследования.
Гранулоциты не подвергаются предварительному выделению и отмывке.
Помимо этого, оценка фагоцитоза с помощью проточной цитометрии позволяет избежать ряда недостатков традиционного метода микроскопирования в мазках.

Показания для назначения

Подозрение на генетически обусловленный или приобретённый иммунодефицит, наличие в анамнезе тяжёлых бактериальных и/или грибковых инфекций, хронические воспалительные заболевания бактериальной природы, рецидивирующие гнойные лимфадениты, абсцессы внутренних органов, хронический гранулематоз, частый/длительный лейкоцитоз и наличие других маркеров воспаления. 

Маркер

Маркер функциональных нарушений фагоцитов.

Клиническая значимость

Правила подготовки пациента

Правила доставки биоматериалов в лабораторию

Интерференция:

Интерпретация:

• Высокая спонтанная активность может свидетельствовать о системном воспалительном процессе, активации фагоцитов в периферической крови. 

• Сниженная окислительная интенсивность. Крайне низкие показатели (1/10 и ниже от нормы) окислительной интенсивности после стимуляции E.coli и PMA являются диагностическим маркером дефицита миелопероксидазы (MPO) и хронической гранулематозной болезни (ХГБ). Для дифференциальной диагностики между дефицитом МРО и ХГБ необходимо дополнительное обследование – тест с нитросиним тетразолием (НСТ-тест), который при дефиците МРО будет нормальным, а при ХГБ – сниженным. Интенсивность окислительного взрыва (индекса стимуляции) зависит от мутации сразу нескольких ферментов NADPH-оксидазного каскада. Если у пациента женского пола встречается две субпопуляции стимулированных гранулоцитов, различающихся по интенсивности окислительного взрыва, то это может свидетельствовать об Х-сцепленном носительстве дефицитного гена хронической гранулематозной болезни CYBB. Незначительные отклонения от нормы теста с дигидрородамином (DHR-тест) могут отмечаться при дефиците глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы (GP6PD) и при некоторых других дефектах фагоцитоза, однако они не являются специфичными. Если положительный контроль стимуляции (PMA) положительный, а тестируемый образец (стимуляция E.coli) отрицательный, то скорее всего образец крови содержит соли EDTA или цитрата в качестве антикоагулянта. Необходимо сделать перезабор БМ, используя антикоагулянт Na-гепарин. На показатели DHR теста существенное влияние может оказывать использование системных глюкокортикоидов, приводя к временному снижению его показателей.
  Низкая фагоцитарная активность является опосредованным показателем наличия дефекта фагоцитоза. Может наблюдаться также при нарушении транспортировки крови и накоплении большого количества поврежденных фагоцитов, не способных отвечать на стимул. Низкая фагоцитарная активность может встречаться при сепсисе, диабете и других заболеваниях, характеризующихся общей сильной интоксикацией и/или истощением.