Діагностичний напрямок
Інфекційне ураження організму
Загальна характеристика
Інфекція, спричинена Clostridioides difficile (CDI), є однією з найпоширеніших причин антибіотик-асоційованої діареї та нозокоміальних інфекцій. Захворювання може варіювати від легкої водянистої діареї до тяжкого псевдомембранозного коліту, токсичного мегаколону, сепсису та смерті. Основним фактором вірулентності є продукція токсинів А та В токсигенними штамами бактерії.
Поширеність
•C. difficile є провідною причиною госпітальної інфекційної діареї;
•Найвищий ризик мають пацієнти після антибіотикотерапії, госпіталізації, люди старші 65 років та імуноскомпрометовані пацієнти;
•Останніми роками зростає кількість випадків позалікарняної CDI, навіть серед осіб без класичних факторів ризику.
Чому це дослідження важливе?
Основною причиною розвитку CDI є порушення нормальної кишкової мікробіоти, найчастіше після застосування антибіотиків. За цих умов C. difficile активно розмножується, а токсигенні штами починають продукувати токсини А і В, які ушкоджують слизову оболонку товстої кишки.
Складність діагностики полягає в тому, що:
•носійство C. difficile може бути безсимптомним;
•не всі штами продукують токсини;
•лише виявлення бактерії не завжди означає наявність захворювання.
Саме тому одночасне визначення GDH і токсинів А та В значно підвищує клінічну інформативність дослідження.
Не рекомендується тестувати сформований кал або безсимптомних носіїв, відповідно до міжнародних рекомендацій ( Laboratory Tests for the Diagnosis of Clostridium difficile https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC7042017 , Comparative Evaluation of Three Immunoassays for the Simultaneous Detection of Clostridioides difficile Glutamate Dehydrogenase and Toxin A/B https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9145049/
Тест не призначається:
•Дітям до 1 року у зв'язку з високим відсотком хибнопозитивних результатів у цій віковій групі;
•Для контролю ефективності лікування, тому що у деяких пацієнтів ще тривалий час після клінічного одужання у калі виявляється токсин C.difficilе.
Показання для призначення
Дослідження рекомендовано пацієнтам за наявності:
1.Гострої діареї (≥3 неоформлених випорожнення протягом 24 годин);
2.Діареї, асоційованої з прийомом антибактеріальних препаратів, особливо у пацієнтів літнього віку та осіб із супутніми хронічними захворюваннями;
3.Підозри на нозокоміальну інфекцію кишечника, пов'язану з C. difficile;
4.Клінічної підозри на клостридіальну інфекцію або псевдомембранозний коліт;
5.Рецидиву діареї після раніше перенесеної інфекції, спричиненої C. difficile;
6.Імуносупресивних станів (у тому числі на тлі протипухлинної терапії, трансплантації, прийому імуносупресантів) або онкогематологічних захворювань, що супроводжуються діареєю;
Маркер
Тест одночасно визначає три маркери:
1. Глутаматдегідрогеназа (GDH)
GDH — фермент, який синтезують усі штами C. difficile, як токсигенні, так і нетоксигенні.
Виявлення GDH свідчить про присутність бактерії в калі, але не підтверджує продукцію токсинів.
2. Токсин А
Ентеротоксин, що спричиняє:
•секрецію рідини;
•запалення;
•ушкодження слизової оболонки.
3. Токсин В
Цитотоксин, який сьогодні вважається основним фактором вірулентності більшості клінічно значущих штамів.
Клінічна значущість
Дослідження дозволяє:
•швидко оцінити ймовірність CDI;
•диференціювати можливе безсимптомне носійство від токсигенної інфекції;
•визначити необхідність подальшого підтверджувального тестування методом ПЛР;
•сприяти своєчасному встановленню діагнозу та вибору оптимальної тактики лікування;
•забезпечити раціональне використання лабораторних методів діагностики відповідно до сучасних клінічних рекомендацій.
Склад показників:
Глутаматдегідрогеназа
Референтні значення:
Токсин А
Референтні значення:
Токсин В
Референтні значення:
Правила доставки біоматеріалів до лабораторії
кал
Біоматеріал для дослідження: Кал. Тип пробірки, об’єм БМ в пробірці: Контейнер для збору біоматеріалу. ПреА обробка перед транспортуванням: зберігати у холодильнику. Умови доставки: Температура від 18 до 25 градусів, 2 год. Коментар: Увага! Для біохімічних/онкологічних досліджень потрібен окремий контейнер.
Біоматеріал для дослідження: Кал. Тип пробірки, об’єм БМ в пробірці: Контейнер для збору біоматеріалу. ПреА обробка перед транспортуванням: зберігати у холодильнику. Умови доставки: Температура від 2 до 8 градусів, 24 год. Коментар: Увага! Для біохімічних/онкологічних досліджень потрібен окремий контейнер.
Інтерференція:
Інтерферуючі сполуки НЕ впливають на результат до концентрації Аскорбінова кислота < 20 мг/дл Щавлева кислота < 60 мг/дл Білірубін < 100 мг/дл Сечова кислота < 60 мг/дл Аспірин < 20 мг/дл Сечовина < 2000 мг/дл Глюкоза < 2000 мг/дл Кофеїн < 40 мг/дл Альбумін < 2000 мг/дл На результат можуть впливати:
•недостатня кількість калу;
•неоднорідність зразка;
•тривале зберігання при кімнатній температурі;
•багаторазове заморожування/розморожування;
•використання сформованого калу;
•дослідження без клінічних симптомів;
•низька концентрація токсинів на ранніх або пізніх стадіях інфекції.
Інтерпретація:
Інтерпретацією результату повинен займатися кваліфікований фахівець, який чітко розуміє переваги та обмеження тесту, у контексті всіх клініко-анамнестичних даних. Неправильне використання тесту може збільшити ймовірність постановки помилкового діагнозу та призвести до непотрібних втручань і зниження якості життя пацієнта.
GDH — високочутливий маркер присутності C. difficile, але не дозволяє відрізнити токсигенні штами від нетоксигенних.
Токсин А свідчить про продукцію ентеротоксину та підтримує діагноз активної інфекції за наявності відповідної клінічної картини.
Токсин В є основним фактором вірулентності більшості сучасних клінічних штамів C. difficile і має вирішальне значення у розвитку ушкодження слизової оболонки товстої кишки. Існують клінічно значущі штами A−/B+, тоді як штами A+/B− трапляються значно рідше.
Одночасне виявлення GDH і токсинів А/В має високу діагностичну цінність та дозволяє швидко ідентифікувати пацієнтів із високою ймовірністю активної CDI.
Негативний результат не виключає інфекцію повністю, якщо клінічна підозра залишається високою. У таких випадках рекомендовано застосовувати дво- або три-етапний алгоритм діагностики (зокрема ПЛР), відповідно до рекомендацій IDSA/SHEA та ESCMID.Результат Клінічна інтерпретація GDH (-), токсин А (-), токсин В (-) C. difficile не виявлено або концентрація антигену і токсинів нижча за межу чутливості тесту. За високої клінічної підозри на CDI доцільно розглянути повторне дослідження або застосування методу ПЛР GDH (+), токсин А (-), токсин В (-) Виявлено C. difficile, однак токсини не визначаються. Можливі безсимптомне носійство, нетоксигенний штам або низький рівень продукції токсинів. Рекомендується інтерпретувати результат з урахуванням клінічної картини та, за потреби, підтвердити методом ПЛР GDH (+), токсин А (+), токсин В (-) Виявлено токсигенний штам C. difficile, який продукує токсин А. За наявності клінічних симптомів результат свідчить на користь активної клостридіальної інфекції (CDI) GDH (+), токсин А (-), токсин В (+) Виявлено токсигенний штам C. difficile, що продукує токсин В. Більшість сучасних клінічно значущих штамів продукують саме токсин В, який вважається основним фактором вірулентності. За наявності клінічних проявів результат свідчить на користь CDI GDH (+), токсин А (+), токсин В (+) Виявлено C. difficile та обидва основні токсини. У поєднанні з клінічними симптомами результат підтверджує високу ймовірність активної токсигенної інфекції C. difficile GDH (-), токсин А (+) або токсин В (+) Нетиповий (дискордантний) результат. Може бути пов'язаний з дуже низькою концентрацією GDH, аналітичними особливостями або рідкісними причинами. Рекомендується повторне дослідження та/або підтвердження методом ПЛР
