Хеликобактериоз, H. pylori, ДНК методом ПЦР – качественный. с определением резистентности к кларитромицину

Общая характеристика

Одной из основных терапевтических проблем на протяжении многих десятилетий было лечение язвенной болезни и хронического гастрита, а также профилактика рака желудка. В настоящее время установлено, что эти заболевания в большинстве случаев обусловлены инфекцией Helicobacter pylori. Подсчитано, что ≈60 % мировой популяции инфицирована H. pylori (в Восточной Европе 80% взрослых и 30% детей и молодежи). Инфицирование происходит алиментарным путём; единственным известным резервуаром бактерии является слизистая желудка человека. H. pylori – это грамотрицательный микроорганизм спиралевидной формы, который адаптировался к жизни в кислоте. Он вызывает хронический гастрит, который может прогрессировать до тяжелых осложнений, таких как язвенная болезнь, аденокарцинома желудка и MALT-лимфома желудка. Своевременное лечение инфекции H. рylori в сочетании с коррекцией образа жизни является составной частью лечения и дальнейшего возникновения пептической язвы и злокачественных новообразований желудка.

Современное лечение инфекции H. pylori состоит из тройной или четвертной схем, включающих ингибитор протонной помпы и антибиотики, такие как амоксициллин и кларитромицин. Однако побочные эффекты, плохое соблюдение режима лечения и резистентность к антибиотикам являются распространенными причинами неэффективности лечения.

Одновременное выявление и идентификация Helicobacter pylori и 3 основных мутаций, вызывающих резистентность к кларитромицину, с помощью ПЦР в реальном времени является доказанной необходимостью перед назначением терапии. https://www.dec.gov.ua/wp-content/uploads/2023/08/2023_kn-peptychna_vyrazka_.pdf Пептическая язва желудка и двенадцатиперстной кишки Клиническое руководство, основанное на доказательствах  за 2023г.
Резистентность к кларитромицину происходит, за очень немногими исключениями, из-за мутации в гене 23S рРНК. Относительно немного мутаций (самое главное, A2143G, A2142G и A2142C) ответственны за почти всю клиническую резистентность.
Согласно новому клиническому руководству: «Пептическая язва желудка и двенадцатиперстной кишки. Клиническое руководство, основанное на доказательствах за 2023г». https://www.dec.gov.ua/wp-content/uploads/2023/08/2023_kn-peptychna_vyrazka_.pdf ВОЗ и Совет Европейского Союза выступают за разумное использование антибиотиков во избежание развития бактериальной резистентности, что является одной из наибольших угроз глобальному здоровью.
Тест на чувствительность к кларитромицину, если он доступен через проведение молекулярных методов или культуры, рекомендуется перед назначением любой терапии, содержащей кларитромицин.Согласие 91%. Уровень доказательности A1. Применение систематического определения резистентности к кларитромицину позволит использовать оптимизированную тройную терапию для 60–90% пациентов в соответствии с рекомендациями EHSG (European Helicobacter and Microbiota Study Group (EHSG) – Европейская группа по изучению Helicobacter pylori), а следовательно, ограничит последствия четвертной терапии.

Показания для назначения

1. Диагностика инфекции Helicobacter pylori у пациентов с диспепсическими расстройствами, гастритом, язвенной болезнью желудка и 12-перстной кишки, и другой патологией ЖКТ.
2. Определение чувствительности Helicobacter pylori к кларитромицину с целью повышения эффективности эрадикационной терапии (путем назначения других антибиотиков), у пациентов с диспепсическими расстройствами, гастритом, язвенной болезнью желудка и 12-перстной кишки и другой патологией.
3. Диагностика инфекции Helicobacter pylori и определение чувствительности к кларитромицину у пациентов, которым может быть рекомендована эрадикационная терапия, а именно: с железодефицитной анемией невыясненного генеза, хронической идиопатической тромбоцитопенической пурпурой, родственникам 1 степени родства больных с раком желудка.

Маркер

Маркер наличия возбудителя Helicobacter pylori в исследуемом биоматериале. Посредством мультиплексной полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют мутации А2143G, А2142G и А2142C в гене 23S рРНК, которые являются маркером резистентности к кларитромицину.

Клиническая значимость

Правила подготовки пациента

Правила доставки биоматериалов в лабораторию

Интерференция:

• 
  

  Interfering         Substances                        Test concentration
  1                        Amoxicillin                            206 μmol/L
  2                        Barium sulfate                      5 mg/ml
  3                        Bilirubin                               342 μmol/L
  4                        Bismuth Subsalicylate (pepto-Bismol) 0.175 mg/ml
  5                        Cimetidine (Tagamet)         79.2 μmol/L
  6                        Clarithromycin                     26.7 μmol/L
  7                        Hemoglobin human             2 g/L
  8                        Metronidazole                     701 μmol/L
  9                        Mucin (bovine submaxillary gland, type I-S) 3 mg/ml
  10                      Omeprazole (prilosec OTC) 17.4 μmol/L
  11                      Palmitic Acid                         6 mmol/L
  12                      Stearic acid                           0.4 mmol/L
  13                      Triglyceride (Intralipid)          37 mmol/L 

  Добавление 13 приведенных в таблице веществ, в представленных концентрациях не повлияло ( ↑, ↓) на полученный результат теста.

• Присутствие в образце кала крови (гемоглобин и продукты его распада), желчи, избыток неорганических солей, тяжелых металлов, полисахаридных комплексов и белков, приём антибактериальных препаратов, ИПП ( омепразол, пантопразол), препаратов висмута (де-нол, Пепто-Бисмол) может приводить к ложно-отрицательному результату. 

Интерпретация:

• Результат		Комментарий
  Хеликобактериоз, Helicobacter pylori, ДНК методом ПЦР – качеств.	Мутация 23S рРНК*
  +	+	Определен H. pylori и установлена резистентность к кларитромицину
  +	-	Определен H. Pylori, не установлена резистентность к кларитромицину
  -	-	Не обнаружено, не установлена резистентность

  * Мутация 23S рРНК включает А2143G, А2142G и А2142C

• Один анализ не должен использоваться как единственный критерий для принятия решения о лечении; результаты этого теста должны соотноситься с клиническими проявлениями и результатами других лабораторных тестов. Отрицательный результат (отсутствие в материале Helicobacter pylori) не отменяет наличие возбудителя или активного заболевания. H. pylori может переходить в кокоидную форму, когда им тяжело выживать в окружающей среде, и эта характеристика может препятствовать точному обнаружению микроорганизма. Увеличение наличия кокоидной формы и наличие мутации может привести к ложноотрицательному результату.