Cроки выполнения
Наследственный гемохроматоз - это генетически обусловленное, системное метаболическое заболевание, когда нарушается регуляция обмена железа, в частности механизмов, связанных с гепсидином, что приводит к его чрезмерному всасыванию и постепенному накоплению в органах и тканях.
Чаще поражается печень, перегрузка железом также может вызвать поражение поджелудочной железы, сердца, суставов, эндокринных органов и кожи.
Основные виды:
• Первичный (наследственный): генетическое заболевание (чаще всего из-за мутации в гене HFE), передаваемое от родителей;
• Вторичный: развивается вследствие других состояний, например, частых переливаний крови, хронических болезней печени или длительного приема препаратов железа.
При отсутствии своевременной диагностики и лечения заболевание может прогрессировать до фиброза и цирроза печени, гепатоцеллюлярной карциномы, сахарного диабета, кардиомиопатии и других системных осложнений.
По данным Европейской ассоциации по изучению заболеваний печени (EASL), гемохроматоз является одним из наиболее распространенных наследственных заболеваний взрослых в европейских популяциях. Однако распространенность генетических вариантов HFE и частота клинически манифестного заболевания не тождественны: не все носители соответствующих вариантов имеют перегрузку железом.
Генетический профиль предполагает исследование двух распространенных вариантов:
•C282Y (p.Cys282Tyr) – основной генетический вариант, ассоциированный с классическим HFE-ассоциированным гемохроматозом. Наибольшее клиническое значение имеет гомозиготный генотип C282Y/C282Y в сочетании с лабораторными признаками перегрузки железом; других генотипов диагноз требует подтверждения тканевой перегрузки железом, в частности с помощью МРТ печени или биопсии по показаниям;
• H63D (p.His63Asp) – распространенный вариант HFE, клиническое значение которого зависит от генотипа, фенотипических признаков перегрузки железом и других факторов; вариант H63D сам по себе не является достаточным основанием для диагностики наследственного гемохроматоза;
Особое внимание уделяется сочетанию C282Y и H63D у одного пациента - компаунд-гетерозиготности C282Y/H63D. Этот генотип ассоциируется с более низким риском клинически значимой перегрузки железом, чем гомозиготность C282Y/C282Y. При перегрузке железом важно оценить сопутствующие заболевания печени, метаболические нарушения, употребление алкоголя и другие возможные факторы.
Генотипирование вариантов H63D и C282Y гена HFE рекомендовано пациентам при наличии клинических или лабораторных признаков, которые могут свидетельствовать о наследственном гемохроматозе, в частности:
1.Устойчивое повышение насыщения трансферрина железом (НТЗ), особенно более 45% у женщин и более 50% у мужчин;
2.Сочетание повышенного ферритина и повышенного насыщения трансферрина железом (НТЗ);
3.Подтвержденный наследственный гемохроматоз у родственников первой степени родства;
4.Невыясненные нарушения функции печени в сочетании с биохимическими признаками перегрузки железом;
5.Признаки возможного системного накопления железа, в частности поражения печени, эндокринных нарушений или артропатии, в сочетании с соответствующими лабораторными изменениями;
6. Потребности в уточнении генетической причины нарушений обмена железа и определении дальнейшей диагностической тактики.
Изолированное повышение ферритина при нормальном насыщении трансферрина железом само по себе не является достаточным показанием к генотипированию HFE. Прежде всего, необходимо оценить возможные воспалительные, метаболические, алкоголь-ассоциированные, инфекционные и другие причины гиперферитинемии.
Ген HFE участвует в регуляции гомеостаза железа. Варианты гена HFE могут нарушать регуляцию обмена железа и повышать риск его чрезмерного накопления. Результат оценивают вместе с насыщением трансферрина железом, ферритином и клиническими данными.
Генетическое исследование HFE помогает:
• установить наличие распространенных генетических вариантов, связанных с наследственным гемохроматозом;
• уточнить возможную наследственную причину повышения насыщения трансферрина железом и/или ферритина;
• оценить генетический риск у пациентов с подозрением на HFE-ассоциированный гемохроматоз;
•дополнить биохимическое обследование и определить дальнейшую диагностическую тактику;
•обосновать обследование взрослых родственников первой степени родства пациента с подтвержденным наследственным гемохроматозом;
•избегать ошибочного отождествления изолированного повышения ферритина с генетическим гемохроматозом.
Генетический результат следует интерпретировать в комплексе с насыщением трансферрина железом (TSAT-Transferrin Saturation), ферритином, клиническими данными и, по показаниям, результатами визуализации печени, поскольку выявление вариантов HFE само по себе не подтверждает наличие клинически манифестного гемохроматоза.
Метод: Полимеразная цепная реакция в реальном времени
венозная кровь
За 4 часа Выдержать голодание, исключить жирную пищу. Можно пить воду. Для детей до 1 года - желательно придерживаться максимально возможного промежутка между кормлениями или непосредственно перед следующим кормлением.
На результат исследования могут влиять недостаточное количество или низкое качество выделенной ДНК, наличие ингибиторов ПЦР и контаминация образца посторонней ДНК. Гепарин может ингибировать реакцию ПЦР, поэтому для исследования рекомендуется использовать биологический материал, предусмотренный инструкцией к тест-системе.
У пациентов после аллогенной трансплантации костного мозга или гемопоэтических стволовых клеток генотип периферической крови может отражать генотип донора.
Интерпретацией результата должен заниматься квалифицированный специалист, четко понимающий преимущества и ограничения теста в контексте всех клинико-анамнестических данных. Неправильное использование теста может увеличить вероятность постановки ошибочного диагноза и привести к ненужным вмешательствам и снижению качества жизни пациента.
Для генетического исследования HFE не применяют референтные интервалы в обычном смысле как для биохимических показателей. Результат описывает генотип по исследованным вариантам.Как интерпретировать результат в клиническом контексте?
• C282Y/C282Y + повышенные НТЗ и ферритин: веские основания для диагностики HFE-ассоциированного гемохроматоза; необходимо оценить степень перегрузки железом и возможное поражение органов;
• C282Y/C282Y + нормальные НТЗ и ферритин: нормальные показатели насыщения трансферрина железом и ферритина не свидетельствуют о наличии биохимически выраженной перегрузки железом на момент обследования. Такой результат не подтверждает наличие клинически манифестного гемохроматоза, но указывает на генетическую предрасположенность и требует дальнейшего наблюдения с периодическим контролем НТЗ и ферритина;
• C282Y/H63D + повышенные НТЗ и ферритин: необходимо подтвердить наличие перегрузки железом и оценить другие факторы риска. Сам генотип не достаточен для установления диагноза;
• H63D/H63D или гетерозиготные варианты: при наличии значительной перегрузки железом следует искать сопутствующие, приобретенные или альтернативные генетические причины;
• Негативный результат по обоим вариантам: при стойких лабораторных признаках перегрузки железом необходимо продолжить дифференциальную диагностику.Биохимические показатели, которые рекомендуется оценивать вместе с генетическим результатом:
• насыщение трансферрина железом (НТЗ);
• ферритин;
• сывороточное железо и трансферрин или общая железосвязывающая способность сыворотки - для расчета НТЗ, если это необходимо;
• АЛТ, АСТ и другие печеночные показатели в соответствии с клинической ситуацией.
Ферритин является белком острой фазы и может повышаться при воспалении, инфекциях, метаболически ассоциированной стеатотической болезни печени, употреблении алкоголя и других состояниях. Поэтому изолированное повышение ферритина не доказывает наличия наследственного гемохроматоза.
Практическая ценность для врача:
Генотипирование вариантов H63D и C282Y гена HFE позволяет:
•Уточнить возможную наследственную этиологию нарушений обмена железа;
•Дифференцировать пациентов с подозрением на HFE-ассоциированный гемохроматоз от пациентов с другими причинами повышения ферритина;
•определить необходимость дальнейшего подтверждения тканевой перегрузки железом;
•Обосновать направление к гепатологу или генетику при соответствующих клинических показаниях;
• определить целесообразность генетического обследования взрослых родственников пациентов с подтвержденным C282Y/C282Y-гемохроматозом;
•Сформировать дальнейшую тактику клинического наблюдения и оценки риска поражения органов.ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА И ПРИЧИНЫ ВЛИЯЮЩИЕ НА ИНТЕРПРЕТАЦИЮ:
1. Отсутствие оценки тяжести заболевания. Генотип не определяет непосредственное количество железа в организме, степень фиброза печени или наличие поражения других органов;
2. Воздействие сопутствующих факторов. Алкоголь, метаболические заболевания печени, воспалительные процессы, гемолитическое состояние, повторные трансфузии и чрезмерное поступление железа могут влиять на показатели обмена железа;
3. Технические ограничения. Выявление вариантов зависит от характеристик тест-системы, качества ДНК и наличия возможных ингибиторов амплификации;
4 .Необходимость комплексной оценки. При клиническом подозрении на перегрузку железом отрицательный результат тестирования двух вариантов HFE не должен являться основанием для прекращения обследования.
5. Исследование определяет только два конкретных варианта гена HFE - C282Y и H63D. Негативный результат не исключает других генетических причин перегрузки железом, включая варианты генов HJV, HAMP, TFR2 и SLC40A1, а также приобретенные причины накопления железа.
